文章摘要: PCR实验室又称基因扩增实验室。它利用分子生物学技术对核酸片段进行扩增,也可以看作是一种特殊的核酸体外复制。采用基因追踪系统对人体内容进行掌握,检测精度可达纳米级。现在PCR技术已经广泛应用于传染病、肿瘤靶向、生殖遗传学等领域,但由于该技术对待测
PCR实验室又称基因扩增实验室。它利用分子生物学技术对核酸片段进行扩增,也可以看作是一种特殊的核酸体外复制。采用基因追踪系统对人体内容进行掌握,检测精度可达纳米级。现在PCR技术已经广泛应用于传染病、肿瘤靶向、生殖遗传学等领域,但由于该技术对待测核酸进行了大量的多重检测,甚至是少量的污染 很容易造成假阳性结果。其次,PCR实验室要求比较高,实验过程复杂。如果中间环节有遗漏,可能会造成假阴性结果。
在PCR实验过程当中很容易发生污染。造成污染的主要原因有四个:
1、PCR产物污染。它也是PCR实验室污染的常见原因。PCR产物经过反复扩增后,拷贝量远远高于PCR的检测限,因此即使是少量的污染也足以造成假阳性检测结果。
2、试剂污染。在试剂制备过程当中,试剂因接触受污染的容器、移液器、移液器吸头、溶液等而受到污染。
3、待测样品被污染。放置样品的容器被污染或由于容器密封性不好造成样品与外界的接触被污染;其次,在核酸提取过程当中使用了被污染的移液器或移液器吸头,造成PCR实验室受到污染;另外,有些样品含有杂质,如果它们散落在空气中,可能会发生交叉污染。
4、气溶胶污染。如果气溶胶含有病毒和其他污染物并扩散到空气中,很可能会污染PCR实验室。气溶胶是由空气和液体表层之间的摩擦产生的。打开盖子,摇晃反应管,反复抽吸污染进样器的样品会形成气溶胶,造成交叉污染。根据计算,一个气溶胶粒子可以包含48000个拷贝。因此,应特别注意气溶胶造成的污染。
只要PCR实验室被污染,之前的结果报告就无效,不可进行其他的实验操作。因此,必须找到污染源并彻底清除,才能获得准确有效的实验结果。
PCR实验室出现污染的原因
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